Fluorescence Mikroskoop: útgongspunten fan de metoade

Opname en re-útstjit fan ljocht fierder anorganyske en organyske Fluids is it gefolch fan phosphorescence of fluorescence. It ferskil tusken de ferskynsels is de doer fan it ynterval tusken opname en de útstjit fan ljocht flux. Doe't de fluorescence fan dizze prosessen komme hast tagelyk, wylst phosphorescence - mei wat fertraging.

histoaryske ynformaasje

Yn 1852, Britske wittenskipper Stokes, earst beskreaun fluorescence. Hy yntrodusearre in nije termyn as gefolch fan 'e eksperiminten mei fluorspar, dy't emit read ljocht ûnder Ultraviolet ljocht. Stokes notearre in nijsgjirrich fenomeen. It is fûn dat de golflingte fan it fluorescent strieling is altyd grutter as de stream fan de excitation ljocht.

Om befêstigjen de hypoteze yn de 19e ieu hawwe der in soad eksperiminten. Se die bliken dat in ferskaat oan gebrûk fluoresce ûnder de ynfloed fan Ultraviolet ljocht. Under de materialen, ûnder oare dingen, west kristallen, Resins, mineralen, chlorofyl, groffe drugs, anorganyske ferbiningen, vitaminen, oaljes. De direkte brûken fan kleurstoffen foar biologyske testen begûn pas yn 1930,

Fluorescence Mikroskoop: beskriuwing

Guon fan 'e materialen dy't brûkt wurde yn' e earste helte fan de 20e ieu stúdzjes eksposearre hege spesifisiteit. стал важнейшим инструментом и в биомедицинских, и в биологических исследованиях. Mei tank oan de foarstelling, dat koe net berikt wurde troch kontrastearjende metoaden, de metoade fan fluorescence Mikroskoop wurden is in essinsjeel ark yn biomedical en biologysk ûndersyk. Like wichtige resultaten waarden krigen, en foar materialen.

? Wat foardielen docht de metoade fan fluorescence Mikroskoop? Mei help fan nije materialen wurden mooglik en de seleksje fan tige spesifike sel submicroscopic komponinten. Fluorescence Mikroskoop kin ûntdekke inkele molekulen. In ferskaat oan kleurstoffen tastean de identifikaasje fan meardere items tagelyk. Nettsjinsteande de beheinde romtlike resolúsje fan it Diffraktion limyt fan de apparatuer, dy't, yn in bar, ôfhinklik fan de spesifike eigenskippen fan de stekproef, de identifikaasje fan molekulen ûnder dit nivo is ek hiel goed mooglik. Ferskate fan gebrûk nei irradiation exhibit autofluorescence. Dit ferskynsel wurdt in soad brûkt yn petrology, plantkunde, de semiconductor yndustry.

Features

Studearje bist weefsels of sykteferwekkers faak yngewikkeld of te swak of hiel sterk unspecific autofluorescence. Lykwols, de wearde yn stúdzjes kriget ynlieding yn it materiaal ûnderdielen oanslein op in spesifyk golflingte en emitting de nedige ljocht flow yntinsiteit. Fluorochromes fungearje as kleurstoffen steat is selsstannich ferbûn oan struktueren (sichtber of ûnsichtbere). Dêrmei se hawwe in heech ûnderskied nei it doel, en it kwantum opbringst.

стала широко применяться с появлением естественных и синтетических красителей. Fluorescence Mikroskoop is soad brûkt sûnt de komst fan de natuerlike en syntetyske kleurstoffen. Se hie bepaalde yntensiteit profilen fan de útstjit en excitation en doelbewust oan spesifike biologyske doelen.

Identifikaasje fan yndividuele molekulen

Faak, in ideale omstannichheden, kinne jo registrearje in apart elemint gloed. Foar dit, ûnder oare dingen, is it nedich om in foldwaande lege leven fan de detektor en de optischen eftergrûn. Fluorescein molecule nei flater fanwege photobleaching kin emit oant 300 tûzen. Photons. By 20% samling efficiency fan it proses en kin registrearje se yn in bedrach fan likernôch 60 tûzen.

, основанная на лавинных фотодиодах или электронном умножении, позволяла исследователям наблюдать поведение отдельных молекул на протяжении секунд, а в ряде случаев и минут. Fluorescence Mikroskoop basearre op avalanche photodiodes of elektroanysk fermannichfâldigjen, tastien de ûndersikers te observearjen it gedrach fan yndividuele molekulen troch de twade, en yn guon gefallen sels minuten.

kompleksiteit

In wichtige dei yn it foardiel fan 'e ûnderdrukking fan optyske lawaai eftergrûn. Fanwege it feit dat in protte fan 'e materialen dy't brûkt wurde yn' e ynrjochting fan filters en linzen fertoane wat autofluorescence, de ynspanningen fan wittenskippers yn de earste fazen waarden rjochte oan 'e produksje fan ûnderdielen mei in lege fluorescence. Lykwols, lettere eksperiminten hawwe laat ta nije konklúzjes. , основанная на полном внутреннем отражении, позволяет достичь низкого фона и высокоинтенсивного возбуждающего светового потока. Yn it bysûnder, waard fûn dat fluorescence Mikroskoop, basearre op totale ynterne refleksje, dat makket it mooglik om te kommen ta in lege eftergrûn en hege yntinsiteit excitation ljocht.

meganisme

, основанной на полном внутреннем отражении, заключаются в использовании быстрозатухающей или нераспространяющейся волны. De prinsipes fan fluorescence Mikroskoop, basearre op folsleine ynterne spegelbyld is it brûken fan evanescent wave of evanescent. It bart op de grins tusken media mei ferskillende refractive Indices. Yn dit gefal, it ljocht beam giet troch it prisma. It hat in hege brekkingsyndeks parameter.

It prisma grinzet oan de aqueous oplossing of glês mei lege parameter. As in beam fan ljocht rjochte op it op in hoeke, dat is wat kritysker, de bondel is hielendal werom te finen fan de ynterface. Dit ferskynsel, syn bar, soarget nonpropagating weagen. Mei oare wurden, it oanmakke elektromagnetyske fjild dy't penetrates yn in medium mei in legere brekkingsyndeks parameter oan in ôfstân minder as 200 nanometers.

De evanescent weach yntinsiteit fan it ljocht wêze soe genôch te excite fluorophores. Lykwols, fanwege syn ekstreem lyts djipte, syn folume sil hiel lyts. It resultaat is in lege-nivo eftergrûn.

modifikaasje

Fluorescence Mikroskoop is basearre op totale ynterne refleksje, kin wurde útfierd mei epi-ferljochting. Dat freget om linzen mei hege numerike diafragma (op syn minst 1.4, mar it is winsklik dat it berikte 1.45-1.6), en foar in part ferljochte fjild apparatus. Dy lêste wurdt berikt mei in lyts plakje maat. Foar gruttere lykfoarmigens mei help fan in tinne ring, dy't is blokkearre troch in part fan 'e stream. Foar it kritysk hoeke, wêrnei't der in totale refleksje, wy moatte in heech nivo fan brekking fan de ûnderdompeling medium yn de lins en de omslach glês fan de mikroskoop.